背景技術(shù)：

1、白細(xì)胞介素18(il-18)(也稱為干擾素-γ誘導(dǎo)因子，igif)是一種多效性促炎細(xì)胞因子，其可調(diào)節(jié)先天和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)反應(yīng)。已確定il-18在調(diào)節(jié)炎性級(jí)聯(lián)中起重要作用，這使其成為抑制包括但不限于腸道、心臟和肺部的炎性疾病的自身免疫性疾病的理想靶標(biāo)(kaplanski?g.immunol.rev.(2018)；281(1):138-153)。il-18也在臨床前模型中被證明具有抗腫瘤活性。臨床試驗(yàn)中的il-18療法重點(diǎn)關(guān)注使用重組il-18變體來激動(dòng)il-18受體復(fù)合物(il-18r)。這些療法包括sb-485232(tadekinig?alfa)(其是正在由gsk研究用于治療黑色素瘤的重組il-18)，以及st-067(其是由simcha?therapeutic進(jìn)行臨床開發(fā)用于治療實(shí)體瘤的il-18的經(jīng)工程化變體)。

2、il-18r復(fù)合物是一種表達(dá)于包括巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、自然殺傷(nk)細(xì)胞和經(jīng)歷過抗原的t細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞的異二聚體受體(il-18rα/il-18rβ)(gracie?j.a.等人，j.leukoc.biol.(2003)；73(2):213-24)。在il-18與il-18rα亞基結(jié)合后，il-18rβ被募集形成與其他il-1r家族成員共有的誘導(dǎo)高親和力復(fù)合物的信號(hào)傳導(dǎo)通路。這些下游信號(hào)傳導(dǎo)效應(yīng)子通路是與其他關(guān)鍵免疫調(diào)控性分子(如toll樣受體細(xì)胞)共有的(gracie?j.a.等人，j.leukoc。biol.(2003)；73(2):213-24)。

3、雖然早期臨床試驗(yàn)正在研究施用僅由重組或經(jīng)工程化il-18組成的治療劑的方法，但有幾個(gè)因素可能導(dǎo)致此種治療失敗。例如，il-18單獨(dú)與細(xì)胞外信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域成分il-18rα結(jié)合，但不與il-18r受體復(fù)合物的銜接分子il-18rβ結(jié)合(takei?s.等人；arthritis?res.ther.(2011)；13(2):r52)。然而，與il-18r的兩個(gè)亞基都結(jié)合是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)所必需的，并且因此也是激活炎性介質(zhì)所必需的。相反，激動(dòng)性抗體可以被工程化成獨(dú)立地與這兩個(gè)受體亞基接合。重組il-18被它的由il-18r信號(hào)傳導(dǎo)誘導(dǎo)的內(nèi)源性抑制劑il-18結(jié)合蛋白(il-18bp)迅速中和。激動(dòng)性抗體支架不結(jié)合il-18bp，這使得其能夠以持續(xù)的方式激活il-18r。雖然il-18可以被工程化成不與il-18bp結(jié)合(zhao?t等人；nature；583,609-14(2020))，但突變蛋白分子攜帶有顯著的突變負(fù)荷，這使其具有潛在的免疫原性并且因此容易被宿主免疫系統(tǒng)快速中和。最后，重組或內(nèi)源性il-18是一種高親和力、短半衰期蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)會(huì)在施用部位處被局部捕獲并被迅速消除，這限制了其在施用部位遠(yuǎn)側(cè)的腫瘤中誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的能力。抗體激動(dòng)劑可以被工程化成具有長的消除半衰期和對(duì)表達(dá)il-18r的細(xì)胞的減弱的親和力，從而使其相對(duì)于重組或經(jīng)工程化的il-18在靶組織中具有延長的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開通過提供可以有效地使il-18受體的il18rα和il18rβ亞基交聯(lián)并從而激活il-18r介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的異聚體抗體而改進(jìn)了現(xiàn)有技術(shù)。

2、在某些實(shí)施方案中，本公開提供了一種多特異性結(jié)合蛋白，其包含特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分和特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分，其中該多特異性結(jié)合蛋白能夠通過誘導(dǎo)人il-18r的il-18rα和il-18rβ亞基之間的接近來誘導(dǎo)il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)。

3、在一個(gè)方面，本公開提供了一種多特異性結(jié)合蛋白，其包含特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分和特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分，其中該多特異性結(jié)合蛋白刺激抗腫瘤細(xì)胞因子的產(chǎn)生而相對(duì)于il-18對(duì)mcp-1的產(chǎn)生、gm-csf的產(chǎn)生或者急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生的刺激，基本上不刺激mcp-1的產(chǎn)生、gm-csf的產(chǎn)生或者急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生。

4、在某些實(shí)施方案中，抗腫瘤細(xì)胞因子選自由ifn-γ、il-2、il-12、il-15、cd40l和tnfα組成的組。

5、在某些實(shí)施方案中，急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物選自由il-6、il-1β、il-8、il-4、il-5和il-13組成的組。

6、在某些實(shí)施方案中，抗腫瘤細(xì)胞因子和急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物是在外周血單核細(xì)胞(pbmc)測(cè)定中測(cè)定的。

7、在某些實(shí)施方案中，該pbmc測(cè)定包括：1)將第一pbmc群體與多特異性結(jié)合蛋白一起溫育至少24小時(shí)(例如，24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)、60小時(shí)、72小時(shí)、84小時(shí)或96小時(shí))；2)將第二pbmc群體與il-18一起溫育至少24小時(shí)(例如，24小時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)、60小時(shí)、72小時(shí)、84小時(shí)或96小時(shí))；以及3)測(cè)量來自第一和第二pbmc群體的抗腫瘤細(xì)胞因子和急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生。

8、在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白刺激急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生比il-18少至少5倍、少至少10倍、少至少50倍或少至少100倍。

9、在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白刺激急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生比il-18少至少5倍、少至少10倍、少至少50倍或少至少100倍，如在pbmc測(cè)定中所測(cè)量的。

10、在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白刺激gm-csf的產(chǎn)生比ifn-γ的產(chǎn)生少至少5倍、少至少10倍、少至少50倍或少至少100倍。

11、在某些實(shí)施方案中，本公開提供了一種多特異性結(jié)合蛋白，其包含特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分和特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分，其中該多特異性結(jié)合蛋白能夠具有il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)的激動(dòng)劑活性。

12、在某些實(shí)施方案中，本公開提供了一種多特異性結(jié)合蛋白，其包含用于特異性地結(jié)合至人il-18rα的裝置(means)和用于特異性地結(jié)合至人il-18rβ的裝置。在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白能夠通過誘導(dǎo)人il-18r的il-18rα和il-18rβ亞基之間的接近來誘導(dǎo)il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)。在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白能夠具有il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)的激動(dòng)劑活性。

13、在某些方面，第一結(jié)合部分包含il-18rαvhh結(jié)構(gòu)域并且第二結(jié)合部分包含il-18rβvhh結(jié)構(gòu)域。

14、在某些方面，il-18rαvhh結(jié)構(gòu)域和il-18rβvhh結(jié)構(gòu)域位于單獨(dú)的多肽上。

15、在某些方面，il-18rαvhh結(jié)構(gòu)域和il-18rβvhh結(jié)構(gòu)域位于同一多肽上。

16、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有sydmg(seq?id?no:1)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有alrwsggstsyadsvkg(seq?id?no:2)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有tletdsgtywady(seq?id?no:3)的氨基酸序列的hcdr3序列。

17、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有atgmg(seq?id?no:4)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有risstgspnyvdfvkg(seq?id?no:5)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有vgttlfa(seq?id?no:6)的氨基酸序列的hcdr3序列。

18、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有tkglg(seq?id?no:7)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有g(shù)issagwifytqsvkg(seq?idno:8)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有aqsgvplrs(seq?id?no:9)的氨基酸序列的hcdr3序列。

19、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有inimd(seq?id?no:10)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有rispgdiityandvkg(seq?id?no:11)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有rqgagdy(seq?id?no:12)的氨基酸序列的hcdr3序列。

20、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有dyvlg(seq?id?no:13)的氨基酸序列的hcdr1序列，

21、含有cissrgrylnyaetvkg(seq?id?no:14)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有vrrvsevcklaeddfas(seq?id?no:15)的氨基酸序列的hcdr3序列。

22、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有khamg(seq?id?no:16)的氨基酸序列的hcdr1序列。

23、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有aidwsggstyyads?vkg(seq?id?no:17)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有dsytd?yaqlwlpeleseydy(seq?id?no:18)的氨基酸序列的hcdr3序列。

24、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有sytmg(seq?id?no:19)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有aiswsagrtyyadsvkg(seq?id?no:20)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有eeapdwapidcsgygclslydy(seq?id?no:21)的氨基酸序列的hcdr3序列。

25、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有idfmg(seq?id?no:22)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有tittggstnyadsvkd(seq?id?no:23)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有vvhttsrppvly(seq?id?no:24)的氨基酸序列的hcdr3序列。

26、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有nydmg(seq?id?no:25)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有visgpggiafygdsvkg(seq?id?no:26)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有aprgsyyr?rtnsydy(seq?id?no:27)的氨基酸序列的hcdr3序列。

27、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有ryg(seq?id?no:28)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有diywnggntyytdsvkg(seq?id?no:29)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有atsyyavtdplkvay(seq?id?no:30)的氨基酸序列的hcdr3序列。

28、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有nwymr(seq?id?no:31)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有sinsggddtdyadsvkg(seq?id?no:32)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有g(shù)adrv(seq?id?no:33)的氨基酸序列的hcdr3序列。

29、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的第二結(jié)合部分包含il-18rβvhh結(jié)構(gòu)域。

30、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有syt?mg(seq?id?no:19)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有alsww?nggistayadsvkg(seq?id?no:34)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有ardrmpradeydy(seq?id?no:35)的氨基酸序列的hcdr3序列。

31、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有rns?ma(seq?id?no:36)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有aississ?ggrtdyadfvkg(seq?id?no:37)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有pirvaslaydd(seq?id?no:38)的氨基酸序列的hcdr3序列。

32、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有nyh?mg(seq?id?no:39)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有aisssg?gktsypdsvng(seq?id?no:40)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有dprywvaaggsepenvev(seq?id?no:41)的氨基酸序列的hcdr3序列。

33、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有vns?ma(seq?id?no:42)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有vissgg?savyadsvkg(seq?id?no:43)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有g(shù)saayrdy(seq?id?no:44)的氨基酸序列的hcdr3序列。

34、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有rnt?mg(seq?id?no:45)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有hflwt?ggetdyadavkg(seq?id?no:46)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有nyagyridgyqy(seq?id?no:47)的氨基酸序列的hcdr3序列。

35、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有ihv?mg(seq?id?no:48)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有fiinng?gtryadsvkg(seq?id?no:49)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有egtyrgrystdn(seq?id?no:50)的氨基酸序列的hcdr3序列。

36、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有end?vr(seq?id?no:51)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有aitssgi?tgyadsvri(seq?id?no:52)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有tdqy(seq?id?no:53)的氨基酸序列的hcdr3序列。

37、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有l(wèi)nt?mg(seq?id?no:54)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有vesssg?itnyadsvkg(seq?id?no:55)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有klfgrdf(seq?id?no:56)的氨基酸序列的hcdr3序列。

38、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有shn?vmg(seq?id?no:57)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有sigsg?gstnyvdsvkg(seq?id?no:58)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有vvgvyrgs(seq?id?no:59)的氨基酸序列的hcdr3序列。

39、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含含有rdt?mg(seq?id?no:116)的氨基酸序列的hcdr1序列、含有visssg?ntnyadsvlg(seq?id?no:117)的氨基酸序列的hcdr2序列、含有hrtygvdy(seq?id?no:118)的氨基酸序列的hcdr3序列。

40、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rαvhh與seq?id?no:60、seq?id?no:61、seq?id?no:62、seq?id?no:63、seq?id?no:64、seq?id?no:65、seq?id?no:66、seq?id?no:67、seq?id?no:68、seq?id?no:69或seq?id?no:70的氨基酸序列至少約90％同一、至少約95％同一，或至少98％同一。

41、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rαvhh與seq?id?no:71、seq?id?no:72、seq?id?no:73、seq?id?no:74、seq?id?no:75、seq?id?no:76、seq?id?no:77、seq?id?no:78、seq?id?no:79、或seq?id?no:98的氨基酸序列至少約90％同一、至少約95％同一，或至少98％同一。

42、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rαvhh包含seq?id?no:60、seq?id?no:61、seq?id?no:62、seq?id?no:63、seq?id?no:64、seq?id?no:65、seq?id?no:66、seq?id?no:67、seq?id?no:68、seq?id?no:69或seq?id?no:70的氨基酸序列。

43、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的il-18rβvhh包含seq?id?no:71、seq?id?no:72、seq?id?no:73、seq?id?no:74、seq?id?no:75、seq?id?no:76、seq?id?no:77、seq?id?no:78、seq?id?no:79或seq?id?no:98的氨基酸序列。

44、在一些實(shí)施方案中，當(dāng)用激動(dòng)劑活性測(cè)定(例如hek-blue測(cè)定)測(cè)量時(shí)，多特異性結(jié)合蛋白具有達(dá)到或超越超過背景的特定閾值的激動(dòng)劑活性。

45、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約2倍。

46、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約3倍。

47、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約4倍。

48、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約5倍。

49、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約6倍。

50、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約7倍。

51、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約8倍。

52、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約9倍。

53、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約10倍。

54、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約11倍。

55、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約12倍。

56、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約13倍。

57、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約14倍。

58、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白的激動(dòng)劑活性超過背景約15倍。

59、在一些實(shí)施方案中，第一結(jié)合部分結(jié)合人il-18rα(seq?id?no:287)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸ser24、arg25、pro26、thr126、ser127、lys128和ile129。

60、在一些實(shí)施方案中，第一結(jié)合部分結(jié)合人il-18rα(seq?id?no:287)的至少氨基酸ser24、arg25、pro26、thr126、ser127、lys128和ile129。

61、在一些實(shí)施方案中，第一結(jié)合部分結(jié)合人il-18rα(seq?id?no:287)的氨基酸ser24、arg25、pro26、thr126、ser127、lys128、ile129、phe135、phe136、gln137、ile138、thr139、cys140、glu141、asn142、ser143、lys200、thr201和phe202。

62、在一些實(shí)施方案中，第一結(jié)合部分結(jié)合人il-18rα(seq?id?no:287)的氨基酸ser24、arg25、pro26、his27、ile28、thr29、glu122、arg123、gln124、val125、thr126、ser127、lys128、ile129和val130。

63、在一些實(shí)施方案中，第二結(jié)合部分結(jié)合人il-18rβ(seq?id?no:288)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸gln216、gly217、thr218、gln239、val240、arg241、thr242、ile243、lys309、ser310、thr311和leu312。

64、在一些實(shí)施方案中，第二結(jié)合部分結(jié)合人il-18rβ(seq?id?no:288)的至少氨基酸gln216、gly217、thr218、gln239、val240、arg241、thr242、ile243、lys309、ser310、thr311和leu312。

65、在一些實(shí)施方案中，第二結(jié)合部分結(jié)合人il-18rβ(seq?id?no:288)的至少氨基酸asp213、tyr214、his215、gln216、gly217、thr218、gln239、val240、arg241、thr242、ile243、lys306、ser307、ile308、lys309、ser310、thr311和leu312。

66、在一些實(shí)施方案中，第二結(jié)合部分結(jié)合人il-18rβ(seq?id?no:288)的至少氨基酸glu39、glu40、glu41、his112、phe113、leu114、thr115、pro116、gln216、gly217、thr218、gln239、val240、arg241、thr242、ile243、phe279、glu280、arg281、val282、phe283、asn284、lys309、ser310、thr311、leu312、lys313、asp314和glu315。

67、在一些實(shí)施方案中，il-18rα和/或il-18rβ結(jié)合部分是經(jīng)優(yōu)化的。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)優(yōu)化的il-18rα和/或il-18rβ結(jié)合部分是人源化的。在一些實(shí)施方案中，il-18rα結(jié)合部分包含seq?id?no:116、seq?id?no:118、seq?id?no:120或seq?id?no:123的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，il-18rβ結(jié)合部分包含seq?id?no:117、seq?id?no:119、seq?id?no:121、seq?id?no:122、seq?id?no:124、seq?id?no:125、seq?id?no:126、seq?id?no:127或seq?id?no:128的氨基酸序列。

68、在一些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白還包含一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)。在一些實(shí)施方案中，該一個(gè)或多個(gè)經(jīng)修飾鉸鏈包含上鉸鏈區(qū)，該上鉸鏈區(qū)的長度最高為7個(gè)氨基酸或該上鉸鏈區(qū)不存在；以及中鉸鏈區(qū)和下鉸鏈區(qū)，其中下鉸鏈區(qū)連接至重鏈恒定區(qū)的n端。在一些實(shí)施方案中，第一經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)和第二經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)的上鉸鏈區(qū)是相同的序列。在一些實(shí)施方案中，第一經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)和第二經(jīng)修飾鉸鏈區(qū)的上鉸鏈區(qū)是不同的序列。

69、在一些實(shí)施方案中，上鉸鏈區(qū)包含源自人igg抗體的上鉸鏈區(qū)的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，igg抗體選自igg1、igg2、igg3和igg4。在一些實(shí)施方案中，igg抗體是igg1。在一些實(shí)施方案中，上鉸鏈區(qū)包含seq?id?no:274的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，上鉸鏈區(qū)包含seq?id?no:277的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，igg抗體是igg4。在一些實(shí)施方案中，上鉸鏈區(qū)包含seq?id?no:276的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，上鉸鏈不存在。

70、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白還包含全部或部分免疫球蛋白fc結(jié)構(gòu)域或其變體。

71、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域或其變體包含第一fc重鏈和第二fc重鏈。

72、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白還包含具有降低的效應(yīng)子功能的變體fc結(jié)構(gòu)域。

73、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置234處的取代的至少一條fc重鏈。

74、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置234處的取代的至少一條fc重鏈，其中該位于氨基酸位置234處的取代是丙氨酸(a)。

75、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置235處的取代的至少一條fc重鏈。

76、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置235處的取代的至少一條fc重鏈，其中該位于氨基酸位置235處的取代是丙氨酸(a)。

77、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置237處的取代的至少一條fc重鏈。

78、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置237處的取代的至少一條fc重鏈，其中該位于氨基酸位置237處的取代是丙氨酸(a)。

79、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有一個(gè)或多個(gè)根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置234、235或237處的取代的至少一條fc重鏈。

80、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白包含含有一個(gè)或多個(gè)根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置234、235或237處的取代的至少一條fc重鏈，其中位于氨基酸位置234處的取代是丙氨酸(a)，其中位于氨基酸位置235處的取代是丙氨酸(a)，并且其中位于氨基酸位置237處的取代是丙氨酸(a)。

81、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變。

82、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變是杵在臼中(knob-in-hole,kih)突變。

83、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的第一fc重鏈結(jié)構(gòu)域包含產(chǎn)生杵的位于位置366、368或407處的氨基酸取代，并且第二fc重鏈包含產(chǎn)生臼的位于位置366處的氨基酸取代。

84、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的第一fc重鏈包含氨基酸取代t366s、l368a或y407v，并且第二fc重鏈包含氨基酸取代t366w。

85、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變是電荷穩(wěn)定突變。

86、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變是電荷穩(wěn)定突變，并且其中第一fc重鏈包含氨基酸取代n297k，并且第二fc重鏈包含氨基酸取代n297d。

87、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變是電荷穩(wěn)定突變，并且其中第一fc重鏈包含氨基酸取代t299k，并且第二fc重鏈包含氨基酸取代t299d。

88、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變包含經(jīng)工程化二硫鍵。

89、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變包含經(jīng)工程化二硫鍵，并且其中該經(jīng)工程化二硫鍵由包含氨基酸取代y349c的第一fc重鏈和包含氨基酸取代s354c的第二fc重鏈形成。

90、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變包含經(jīng)工程化二硫鍵。

91、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變包含經(jīng)工程化二硫鍵，并且其中該經(jīng)工程化二硫鍵由與第一fc重鏈和第二fc重鏈中的每一者的c端融合的c端延伸肽形成。

92、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)第一結(jié)合部分與第二結(jié)合部分的異二聚化的異二聚化突變，其中該異二聚化突變包含經(jīng)工程化二硫鍵，并且其中該經(jīng)工程化二硫鍵由與第一fc重鏈和第二fc重鏈中的每一者的c端融合的c端延伸肽形成，并且其中第一fc重鏈c端延伸包含氨基酸序列g(shù)ec，并且第二fc重鏈c端延伸包含氨基酸序列scdkt。

93、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的至少一個(gè)fc結(jié)構(gòu)域包含用于促進(jìn)半衰期增加的一個(gè)或多個(gè)突變。

94、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的至少一條fc重鏈包含一個(gè)或多個(gè)根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置252、254或256處的取代。

95、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白的至少一條fc重鏈包含一個(gè)或多個(gè)根據(jù)eu編號(hào)位于氨基酸位置252、254或256處的取代，其中位于氨基酸位置252處的取代是酪氨酸(y)，其中位于氨基酸位置254處的取代是蘇氨酸(t)，并且其中位于氨基酸位置236處的取代是谷氨酸(e)。

96、在某些方面，特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分包含seq?id?no?240-251中的任一個(gè)中所示的氨基酸序列，并且特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分包含seqid?no?252-260中的任一個(gè)中所示的氨基酸序列。

97、在一些實(shí)施方案中，第一和/或第二結(jié)合部分還包含位于結(jié)合部分的n端位置14處的氨基酸取代。

98、在一些實(shí)施方案中，位于結(jié)合部分的n端位置14處的氨基酸是脯氨酸(p)。

99、在一些實(shí)施方案中，該位于結(jié)合部分的n端位置14處的取代包含丙氨酸(a)。

100、在一些實(shí)施方案中，該位于結(jié)合部分的n端位置14處的取代是丙氨酸(a)。

101、在一些實(shí)施方案中，該位于結(jié)合部分的n端位置14處的取代進(jìn)一步穩(wěn)定了結(jié)合部分。

102、在一些實(shí)施方案中，該位于結(jié)合部分的n端位置14處的取代增加了結(jié)合部分的激動(dòng)劑特性。

103、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白被包含在藥物組合物和藥學(xué)上可接受的載劑中。

104、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白被編碼在經(jīng)分離的核酸分子中。

105、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白由表達(dá)載體編碼。

106、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白由宿主細(xì)胞中所包含的表達(dá)載體編碼。

107、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白是在用于治療受試者的疾病或病癥的方法中向有需要的受試者施用多特異性結(jié)合蛋白。

108、在某些方面，多特異性結(jié)合蛋白被用作藥物。

109、在某些方面，本公開提供了一種用于治療受試者的疾病或病癥的方法，該方法通過向受試者施用包含用于特異性地結(jié)合至人il-18rα的裝置和用于特異性地結(jié)合至人il-18rβ的裝置的多特異性結(jié)合蛋白來實(shí)現(xiàn)。

110、在某些方面，本公開提供了用于在受試者中誘導(dǎo)il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)的激動(dòng)劑活性的方法，該方法包括向受試者施用包含特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分和特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分的多特異性結(jié)合蛋白，其中該多特異性結(jié)合蛋白能夠通過誘導(dǎo)人il-18r的il-18rα和il-18rβ亞基之間的接近來誘導(dǎo)il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)。

111、在某些方面，本公開提供了一種用于在受試者中誘導(dǎo)il-18受體信號(hào)傳導(dǎo)的激動(dòng)劑活性的方法，該方法包括向受試者施用包含用于特異性地結(jié)合至人il-18rα的裝置和用于特異性地結(jié)合至人il-18rβ的裝置的多特異性結(jié)合蛋白。

112、在一個(gè)方面，本公開提供了一種刺激受試者中il-18介導(dǎo)的ifn-γ表達(dá)的方法，該方法包括向受試者施用包含特異性地結(jié)合至人il-18rα的第一結(jié)合部分和特異性地結(jié)合至人il-18rβ的第二結(jié)合部分的多特異性結(jié)合蛋白，其中該多特異性結(jié)合蛋白刺激受試者中的抗腫瘤細(xì)胞因子的產(chǎn)生而相對(duì)于il-18對(duì)mcp-1的產(chǎn)生、gm-csf的產(chǎn)生或者急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生的刺激，基本上不刺激受試者中的mcp-1的產(chǎn)生、gm-csf的產(chǎn)生或者急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生。

113、在某些實(shí)施方案中，抗腫瘤細(xì)胞因子選自由ifn-γ、il-2、il-12、il-15、cd40l和tnfα組成的組。

114、在某些實(shí)施方案中，急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物選自由il-6、il-1β、il-8、il-4、il-5和il-13組成的組。

115、在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白刺激急性炎性或th2反應(yīng)標(biāo)志物的產(chǎn)生比il-18少至少5倍、少至少10倍、少至少50倍或少至少100倍。

116、在某些實(shí)施方案中，多特異性結(jié)合蛋白刺激受試者中的gm-csf的產(chǎn)生比受試者中的ifn-γ的產(chǎn)生少至少5倍、少至少10倍、少至少50倍或少至少100倍。