本發(fā)明涉及食品安全檢測的，更具體地，本發(fā)明涉及全氟己基磺酸半抗原、抗原、抗體及其制備方法與應用。
背景技術(shù)：
1、全氟己烷磺酸（pfhxs）具有超凡的環(huán)境穩(wěn)定性，常規(guī)的光解、水解及微生物降解等自然過程均無法有效清除，導致其極易在生態(tài)系統(tǒng)中形成持久性污染。pfhxs在生物體內(nèi)呈現(xiàn)顯著的生物累積效應，可通過食物鏈放大效應對人類健康構(gòu)成潛在威脅。建立針對pfhxs的快速檢測技術(shù)體系，對于保障食品安全、強化環(huán)境監(jiān)測具有重大戰(zhàn)略意義。
2、當前pfhxs的主流檢測技術(shù)仍以儀器分析方法為主導，包括氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（gc-ms）、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（hplc-ms/ms）及超高效液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（uplc-ms）。盡管這些方法具備卓越的檢測精度，但存在設備成本高昂、樣品前處理復雜、檢測周期冗長等技術(shù)瓶頸，難以滿足現(xiàn)場快速篩查的需求。
3、截至目前，國內(nèi)外尚未見針對pfhxs的半抗原設計、人工抗原合成及特異性抗體開發(fā)的系統(tǒng)性報道。這種技術(shù)空白直接制約了免疫檢測方法在pfhxs監(jiān)測中的實際應用。因此，突破pfhxs特異性免疫識別元件的制備技術(shù)瓶頸，開發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的單克隆抗體，進而構(gòu)建靈敏、快速、便攜的免疫檢測體系，已成為完善我國新型污染物監(jiān)測網(wǎng)絡、提升環(huán)境風險防控能力的關(guān)鍵技術(shù)需求。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有檢測方法所存在的問題，本發(fā)明提供了一種全氟己基磺酸半抗原、人工抗原的制備方法，該制備過程更為簡潔高效，為今后的研究提供了必需的人工抗原；并且提供了全氟己基磺酸抗體的制備方法，利用其對全氟己基磺酸具有良好的特異性和檢測靈敏度，可以用來建立全氟己基磺酸的免疫學檢測方法，或建立膠體金免疫層析試紙條快速檢測方法，為間接競爭?elisa試劑盒以及膠體金試紙條的研發(fā)推廣奠定了基礎。
2、根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了全氟己基磺酸半抗原，其結(jié)構(gòu)如式（?。┧荆?/p>
3、，式（?。?。
4、根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了制備全氟己基磺酸半抗原的方法，包括以下步驟：
5、s1.稱取4-氨基丁酸甲酯鹽酸鹽，加入無水二氯甲烷，再加入三乙胺，在冰水浴下，緩慢滴加入含全氟己基磺酰氟的二氯甲烷溶液，滴加完畢后，緩慢升至室溫，反應過夜，反應完成后，加入鹽酸，充分攪拌以酸化反應體系，分液，收集有機相，并用無水硫酸鈉干燥，濃縮有機相至干，得到結(jié)構(gòu)如式（ⅱ）所示的第一中間體，
6、，式（ⅱ）；
7、s2.將步驟s1得到的第一中間體裝入單口瓶中，加入甲醇，攪拌均勻后，加入氫氧化鈉，室溫反應完成后，用稀鹽酸調(diào)ph至4左右，用乙酸乙酯萃取反應液，收集有機相，用無水硫酸鈉干燥有機相，過柱純化，得到式（?。┧镜娜夯撬岚肟乖?/p>
8、在一些實施方式中，步驟s2中第一中間體與氫氧化鈉的質(zhì)量比為1：（3-5）。
9、根據(jù)本發(fā)明的再一個方面，提供了全氟己基磺酸抗原為全氟己基磺酸半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物，載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、雞卵清白蛋白或乳鐵蛋白。
10、根據(jù)本發(fā)明的第四個方面，提供了全氟己基磺酸半抗原或全氟己基磺酸抗原在全氟己基磺酸的免疫學檢測中非疾病診斷的應用。
11、根據(jù)本發(fā)明的第五個方面，提供了全氟己基磺酸抗體是由全氟己基磺酸抗原經(jīng)動物免疫制備得到，全氟己基磺酸抗體為全氟己基磺酸多克隆抗體或全氟己基磺酸單克隆抗體。
12、根據(jù)本發(fā)明的第六個方面，提供了全氟己基磺酸抗體在全氟己基磺酸的免疫學檢測中非疾病診斷的應用。
13、根據(jù)本發(fā)明的第七個方面，提供了一種全氟己基磺酸膠體金試紙條，該試紙條包括膠體金結(jié)合墊和硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上依次設有檢測線和質(zhì)控線，檢測線由全氟己基磺酸抗原劃線得到，質(zhì)控線由羊抗鼠igg二抗劃線得到，膠體金結(jié)合墊上包被有全氟己基磺酸抗體。
14、根據(jù)本發(fā)明的第八個方面，提供了一種全氟己基磺酸酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，該試劑盒包括全氟己基磺酸抗體、酶標板、全氟己基磺酸標準液、羊抗鼠igg二抗和tmb顯色液，酶標板的微孔內(nèi)預先包被全氟己基磺酸抗原。
15、根據(jù)本發(fā)明的第九個方面，提供了一種檢測樣品中全氟己基磺酸的方法，該方法使用全氟己基磺酸抗原和全氟己基磺酸抗體檢測分析樣品中全氟己基磺酸的含量。
16、本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供了一種全氟己基磺酸半抗原，以及相應的全氟己基磺酸抗原和全氟己基磺酸抗體，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的制備方法具有化學試劑容易得到、操作過程簡單、合成步驟簡潔有效、反應產(chǎn)率較高、并且檢測成本較低等優(yōu)勢。本發(fā)明的特異性針對全氟己基磺酸的抗體，效價高，對全氟己基磺酸抗體建立ic-elisa標準曲線其ic50值為1.08?ng/ml，線性范圍為0.52ng/ml?-2.3ng/ml。此外還將其應用于免疫學檢測中，并且由此制備的全氟己基磺酸酶聯(lián)免疫檢測試劑盒或全氟己基磺酸膠體金析試紙條，具有靈敏度高、特異性強、成本低、操作簡單、檢測時間短、保質(zhì)期長等優(yōu)勢，適用于各級食品安全、環(huán)境監(jiān)測等部門對全氟己基磺酸進行現(xiàn)場快速檢測。
1.全氟己基磺酸半抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)如式（?。┧荆?/p>
2.制備權(quán)利要求1所述的全氟己基磺酸半抗原的方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟s2中第一中間體與氫氧化鈉的質(zhì)量比為1：（3-5）。
4.全氟己基磺酸抗原，其特征在于，所述全氟己基磺酸抗原為權(quán)利要求1所述的全氟己基磺酸半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、雞卵清白蛋白或乳鐵蛋白。
5.權(quán)利要求1所述的全氟己基磺酸半抗原或權(quán)利要求4所述的全氟己基磺酸抗原在全氟己基磺酸的免疫學檢測中非疾病診斷的應用。
6.全氟己基磺酸抗體，其特征在于，所述全氟己基磺酸抗體是由權(quán)利要求4所述的全氟己基磺酸抗原經(jīng)動物免疫制備得到，所述全氟己基磺酸抗體為全氟己基磺酸多克隆抗體或全氟己基磺酸單克隆抗體。
7.權(quán)利要求6所述的全氟己基磺酸抗體在全氟己基磺酸的免疫學檢測中非疾病診斷的應用。
8.一種全氟己基磺酸膠體金試紙條，其特征在于，所述試紙條包括膠體金結(jié)合墊和硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜上依次設有檢測線和質(zhì)控線，所述檢測線由權(quán)利要求4所述的全氟己基磺酸抗原劃線得到，所述質(zhì)控線由羊抗鼠igg二抗劃線得到，所述膠體金結(jié)合墊上包被權(quán)利要求6所述的全氟己基磺酸抗體。
9.一種全氟己基磺酸酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求6所述全氟己基磺酸抗體、酶標板、全氟己基磺酸標準液、羊抗鼠igg二抗和tmb顯色液，所述酶標板的微孔內(nèi)預先包被有權(quán)利要求4所述的全氟己基磺酸抗原。
10.一種檢測樣品中全氟己基磺酸的方法，其特征在于，所述方法使用權(quán)利要求4所述的全氟己基磺酸抗原和權(quán)利要求6所述的全氟己基磺酸抗體檢測分析樣品中全氟己基磺酸的含量。