本發(fā)明屬于生物檢測，涉及一種抗體組合物及應(yīng)用，尤其涉及一種針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、阿爾茨海默病(alzheimer's?disease，ad)是一種神經(jīng)退行性疾病，主要表現(xiàn)為記憶力下降、認知功能障礙和行為改變，其病因至今還不是十分清楚。目前研究發(fā)現(xiàn)，β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid，aβ)、tau及tdp-43(tar?dna-bindingprotein?43，tdp-43)蛋白與ad疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

2、研究表明，上述這些蛋白的病理變化可作為ad潛在的生物標志物，有助于早期診斷和疾病監(jiān)測。近年來，采用生物標志物腦脊液和血液生物標志物的ad的診斷技術(shù)取得了一些進展，其中之一就是基于β-淀粉樣蛋白(aβ)的水平。

3、目前研究發(fā)現(xiàn)，ad患者腦脊液中的aβ42水平通常降低，而血漿中的aβ42水平可能升高。此外，基于tau蛋白的一些生物標志物，目前研究發(fā)現(xiàn)，總tau蛋白(t-tau)和磷酸化tau蛋白(p-tau)的水平在ad患者的腦脊液中增加，是疾病的關(guān)鍵標志物。目前研究已經(jīng)證實，血清或腦脊液中ptau217的水平高低與ad發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可以作為ad早期診斷的生物學標記物。

4、2024年，美國fda批準了將血清或腦脊液中磷酸化ptau217蛋白水平的檢測用于早期ad診。該技術(shù)檢測原理基本都是一樣的(見試劑盒檢測原理示意圖1)，都是采用一對配對抗體(包被抗體與檢測抗體)進行檢測樣品。試劑盒所采用的配對抗體中的一個抗體是針對ptau217蛋白的抗體，盡管都是針對一個蛋白同一位點磷酸化的抗體，但是抗體的序列不一樣，當然親和力也會有差異；試劑盒所采用的配對抗體中的另一個抗體是針對tau蛋白某一個位置抗原表位的抗體。目前國內(nèi)外所使用的包被抗體絕大多數(shù)是采用針對ptau217蛋白的抗體，檢測抗體絕大多數(shù)是針對tau蛋白n端的抗體。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決背景技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種檢測特異性更強以及敏感性更高的針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物及其應(yīng)用。

2、為了實現(xiàn)上述任務(wù)，本發(fā)明采取如下的技術(shù)解決方案：

3、一種針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物，其特征在于：所述針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物包括靶向ptau217蛋白抗體以及靶向tau蛋白c端抗體。

4、上述靶向ptau217蛋白抗體包括靶向ptau217蛋白抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸以及靶向ptau217蛋白抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸；所述靶向ptau217蛋白抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸包括217重鏈cdrh1、217重鏈cdrh2以及217重鏈cdrh3；所述靶向ptau217蛋白抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸包括217輕鏈cdrl1、217輕鏈cdrl2以及217輕鏈cdrl3；

5、優(yōu)選地，所述靶向tau蛋白c端抗體包括靶向tau蛋白c端抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸以及靶向tau蛋白c端抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸；所述靶向tau蛋白c端抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸包括c端重鏈cdrh1、c端重鏈cdrh2以及c端重鏈cdrh3；所述靶向tau蛋白c端抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸包括c端輕鏈cdrl1、c端輕鏈cdrl2以及c端輕鏈cdrl3。

6、上述217重鏈cdrh1的氨基酸序列如seq?id?no.16所示或與seq?id?no.16所示序列同源性不低于90％的序列；所述217重鏈cdrh2的氨基酸序列如seq?id?no.17所示或與seq?id?no.17所示序列同源性不低于90％的序列；所述217重鏈cdrh3的氨基酸序列如seqid?no.18所示或與seq?id?no.18所示序列同源性不低于90％的序列；

7、優(yōu)選地，所述217輕鏈cdrl1的氨基酸序列如seq?id?no.19所示或與seq?id?no.19所示序列同源性不低于90％的序列；所述217輕鏈cdrl2的氨基酸序列如seq?id?no.20所示或與seq?id?no.20所示序列同源性不低于90％的序列；所述217輕鏈cdrl3的氨基酸序列如seq?id?no.21所示或與seq?id?no.21所示序列同源性不低于90％的序列；

8、優(yōu)選地，所述c端重鏈cdrh1的氨基酸序列如seq?id?no.22所示或與seq?id?no.22所示序列同源性不低于90％的序列；所述c端重鏈cdrh2的氨基酸序列如seq?id?no.23所示或與seq?id?no.23所示序列同源性不低于90％的序列；所述c端重鏈cdrh3的氨基酸序列如seq?id?no.24所示或與seq?id?no.24所示序列同源性不低于90％的序列；

9、優(yōu)選地，所述c端輕鏈cdrl1的氨基酸序列如seq?id?no.25所示或與seq?id?no.25所示序列同源性不低于90％的序列；所述c端輕鏈cdrl2的氨基酸序列如seq?id?no.26所示或與seq?id?no.26所示序列同源性不低于90％的序列；所述c端輕鏈cdrl3的氨基酸序列如seq?id?no.27所示或與seq?id?no.27所示序列同源性不低于90％的序列。

10、上述靶向ptau217蛋白抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.6所示或與seqid?no.6所示序列同源性不低于90％的序列；所述靶向ptau217蛋白抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.5所示或與seq?id?no.5所示序列同源性不低于90％的序列；

11、優(yōu)選地，所述靶向tau蛋白c端抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.8所示或與seq?id?no.8所示序列同源性不低于90％的序列；所述靶向tau蛋白c端抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.7所示或與seq?id?no.7所示序列同源性不低于90％的序列。

12、用于編碼如前所述的針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物或抗體抗原片段的核苷酸序列，其特征在于：所述核苷酸序列包括：

13、用于編碼靶向ptau217蛋白抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸和/或與抗體的抗原片段的多核苷酸，序列是seq?id?no.1；

14、用于編碼靶向ptau217蛋白抗體重鏈可變區(qū)氨基酸和/或與抗體的抗原片段的多核苷酸，序列是seq?id?no.2；

15、用于編碼靶向tau蛋白c端抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸和/或與抗體的抗原片段的多核苷酸，序列是seq?id?no.3；

16、以及，

17、用于編碼靶向tau蛋白c端抗體重鏈可變區(qū)氨基酸和/或與抗體的抗原片段的多核苷酸，序列是seq?id?no.4。

18、如前所述的針對ptau217蛋白的抗體組合物或如前所述的核苷酸所編碼的抗體或抗體的抗原片段在作為疾病檢測或診斷用試劑盒的應(yīng)用。

19、如前所述的針對ptau217蛋白的抗體組合物或如前所述的核苷酸所編碼的抗體或抗體的抗原片段在作為阿爾茲海默癥檢測或診斷用試劑盒的應(yīng)用。

20、一種檢測或診斷阿爾茲海默癥用的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒至少包括包被抗體和檢測抗體；所述包被抗體是針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物中靶向tau蛋白c端抗體；所述檢測抗體是針對ptau217蛋白檢測的抗體組合物中靶向ptau217蛋白抗體。

21、一種試劑盒的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟：

22、1)靶向ptau217蛋白的單克隆抗體的制備，優(yōu)選地，所述步驟1)的具體實現(xiàn)方式是：合成含有tau第217位點蘇氨酸磷酸化的8個氨基酸小肽slp(pt)pptr，然后將之分別與牛血清白蛋白bsa及匙孔血藍蛋白klh交聯(lián)后，得到bsa-slp(pt)pptr及klh-slp(pt)pptr；將klh-slp(pt)pptr作為免疫原免疫balb/c小鼠，bsa-slp(pt)pptr作為篩選蛋白，經(jīng)過常規(guī)雜交瘤融合及鑒定獲得高親和力及特異性靶向ptau217蛋白的單克隆抗體；

23、2)靶向tau蛋白c端單克隆抗體的制備，優(yōu)選地，所述步驟2)的具體實現(xiàn)方式是：克隆tau蛋白c端74個氨基酸的ctd結(jié)構(gòu)域片段，然后將該片段克隆至含有g(shù)st標簽的原核表達載體中，通過原核蛋白的表達及純化，獲得含有g(shù)st標簽的tau?ctd結(jié)構(gòu)域的融合蛋白；將純化獲得的融合蛋白作為免疫原免疫balb/c小鼠，然后通過常規(guī)免疫及雜交瘤融合，最終獲得針對ctd結(jié)構(gòu)域的高親和力及特異的靶向tau蛋白c端的單克隆抗體；

24、3)將步驟1)得到的靶向ptau217的單克隆抗體作為檢測抗體、將步驟2)得到的靶向tau蛋白c端單克隆抗體作為包被抗體，建立用于檢測ptau217的夾心elisa試劑盒。

25、一種試劑盒的使用方法，其特征在于：所述使用方法包括：

26、1)采集離體ad患者的生物樣本，所述ad患者的生物樣本是血清或腦脊液；

27、2)采用前述的試劑盒，以基于夾心elisa原理的msd方法對步驟1)得到的ad患者的生物樣本的ptau217蛋白水平進行檢測。

28、本發(fā)明具有如下優(yōu)點：

29、相對于全球現(xiàn)有的ad早期診斷技術(shù)，本發(fā)明的包被抗體是靶向tau蛋白c端的抗體，而檢測抗體是靶向ptau217蛋白的抗體。本發(fā)明通過將合成的含有tau第217蘇氨酸磷酸化(ptau217)的小肽位與klh交聯(lián)，然后將之免疫balb/c小鼠，獲得一株高針對ptau217的親和力單克隆抗體。同時，采用單克隆抗體技術(shù)獲得針對tau蛋白第217位蘇氨酸磷酸化蛋白(ptau217蛋白)的高親和力單克隆抗體，使用tau蛋白c端截斷體的gst融合蛋白作為免疫原獲得可以與針對ptau217蛋白抗體配對的高親和力單克隆抗體。以針對tau蛋白c端的單克隆抗體作為包被抗體(coating?antibody)，針對ptau217蛋白的高親和力抗體作為檢測抗體(detecting?antibody)，建立了可以敏感地檢測ad患者血清或腦脊液中的ptau217蛋白水平。由于包被抗體是靶向tau蛋白的c端，檢測抗體是靶向ptau217蛋白的單克隆抗體，同時采用的抗體序列也是全新的，因此，本發(fā)明的特異性更強，檢測敏感性更高，以這對配對抗體所建立的夾心elisa試劑盒為早期ad患者的診斷奠定了基礎(chǔ)，具有重要的意義及臨床應(yīng)用價值。