本發(fā)明屬于中醫(yī)藥，涉及一種免疫調(diào)節(jié)劑在抗腫瘤中的用途。
背景技術(shù)：
1、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，其主要來(lái)源于被腫瘤細(xì)胞招募的循環(huán)單核細(xì)胞和組織駐留巨噬細(xì)胞的原位增殖。腫瘤進(jìn)展過(guò)程中，腫瘤微環(huán)境（tme）中m1型和m2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tams）的比例呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，且通常向m2型傾斜。腫瘤微環(huán)境中，m1型tams表現(xiàn)為抗腫瘤特性，可通過(guò)產(chǎn)生一氧化氮和活性氧等直接殺傷腫瘤細(xì)胞，并分泌il-12、tnf-α等促炎細(xì)胞因子激活th1型免疫反應(yīng)，增強(qiáng)cd8?t細(xì)胞和nk細(xì)胞的腫瘤殺傷能力。m2型tams通過(guò)促血管生成、免疫抑制和促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲，發(fā)揮促腫瘤進(jìn)展的作用。目前針對(duì)tams的治療策略包括靶向清除tams、重塑tams功能表型和抑制tams募集。
2、天然提取物尤其是多糖因其低毒性和免疫調(diào)節(jié)特性成為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的研究熱點(diǎn)，其具有多靶點(diǎn)多活性的特點(diǎn)，可通過(guò)調(diào)控巨噬細(xì)胞極化參與抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)和炎癥相關(guān)疾病的治療。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本發(fā)明提供了一種免疫調(diào)節(jié)劑在抗腫瘤中的用途，所述白刺多糖具有免疫調(diào)節(jié)與菌群調(diào)控活性，通過(guò)白刺多糖與pd-1抗體的聯(lián)合，可增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)從而增強(qiáng)抗腫瘤作用。
2、本年發(fā)明提供了一種白刺多糖的制備方法，包括以下步驟：（1）將收集的白刺果實(shí)干燥后制備成白刺果實(shí)粉；
3、（2）利用熱水浸提所述白刺果實(shí)粉中的有效成分，浸提液過(guò)濾后濃縮，向濃縮液中加入終體積百分含量為80%的乙醇溶液，靜置后收集沉淀，冷凍干燥后得白刺多糖粗品；
4、（3）將所述白刺多糖粗品溶解后過(guò)deae-纖維素柱，經(jīng)洗脫后收集酸性多糖，得ntwp-a，濃縮后冷凍干燥，得凍干的白刺多糖ntwp-a；
5、（4）將所述凍干的白刺多糖ntwp-a溶解后經(jīng)離子交換色譜處理，收集苯酚-硫酸法檢測(cè)顯色最強(qiáng)的單一洗脫峰，經(jīng)濃縮后冷凍干燥，得白刺多糖?ntwp-ap。
6、優(yōu)選的，步驟（1）所述白刺果實(shí)粉的粒徑小于80目。
7、優(yōu)選的，步驟（2）所述浸提時(shí)，熱水的溫度為90℃，且料液比為1：20；
8、所述浸提包括恒溫?cái)嚢杞?次以上，每次時(shí)間為5小時(shí)。
9、優(yōu)選的，步驟（3）中利用所述deae-纖維素柱洗脫進(jìn)行處理時(shí)，首先以0.05mol/lnahco3溶液為洗脫液，洗脫出中性多糖?ntwp-n后；然后依次用?0.1?mol/l、0.25?mol/l、0.5?mol/l?nahco3溶液梯度洗脫，對(duì)各洗脫液進(jìn)行苯酚-硫酸法檢測(cè)，其中顯色最深的洗脫峰為酸性多糖?ntwp-a。
10、優(yōu)選的，步驟（4）所述溶解用tris-hcl?緩沖液進(jìn)行，將溶解后的液體上樣后，用平衡液洗脫30min，收集流出液，而后采用nacl線性梯度洗脫，收集洗脫液；對(duì)流出液和各洗脫液進(jìn)行苯酚-硫酸法檢測(cè)，合并顯色最強(qiáng)的單一洗脫峰。
11、本發(fā)明還提供了利用上述制備方法制備得到的白刺多糖?ntwp-ap。
12、本發(fā)明還提供了上述白刺多糖?ntwp-ap在制備免疫調(diào)節(jié)劑中的應(yīng)用。
13、本發(fā)明還提供了上述白刺多糖?ntwp-ap在制備pd-1抗體增敏劑中的應(yīng)用。
14、本發(fā)明還提供了上述白刺多糖?ntwp-ap在制備巨噬細(xì)胞m2向m1極化轉(zhuǎn)變的促進(jìn)劑中的應(yīng)用。
15、本發(fā)明還提供了一種治療腫瘤的藥物，包括上述白刺多糖?ntwp-ap和pd-1抗體。
16、有益效果
17、本發(fā)明提取得到的白刺多糖具有免疫調(diào)節(jié)活性，其與ifn-γ聯(lián)合可顯著升高促炎細(xì)胞因子水平并減低抗炎細(xì)胞因子水平。此外在腫瘤小鼠模型中，白刺多糖聯(lián)合pd-1抗體能顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)并調(diào)節(jié)小鼠的腸道菌群，增強(qiáng)抗腫瘤效果。
18、本發(fā)明所述白刺多糖的提取方法易于操作，且提取效率高，通過(guò)本方法提取得到的白刺多糖純度為55%~62%左右。本發(fā)明所述白刺多糖的提取過(guò)程簡(jiǎn)便高效：白刺多糖的提取方法操作簡(jiǎn)單，提取效率高，保證了成品的純度及活性，為大規(guī)模生產(chǎn)提供了可能。
19、經(jīng)證實(shí)本發(fā)明所述白刺多糖具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用：白刺多糖聯(lián)合ifn-γ具有顯著的免疫調(diào)節(jié)中，能顯著減少抗炎細(xì)胞因子，增加促炎細(xì)胞因子。本發(fā)明所述白刺多糖具有顯著的抗腫瘤效果：白刺多糖聯(lián)合pd-1抗體的抗腫瘤作用顯著優(yōu)于單味藥物，能顯著抑制腫瘤的增長(zhǎng)并且調(diào)節(jié)腸道菌群。預(yù)示著其在抗腫瘤中的潛在應(yīng)用價(jià)值。
1.一種白刺多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）將收集的白刺果實(shí)干燥后制備成白刺果實(shí)粉；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟（1）所述白刺果實(shí)粉的粒徑小于80目。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟（2）所述浸提時(shí)，熱水的溫度為90℃，且料液比為1：20；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟（3）中利用所述deae-纖維素柱洗脫進(jìn)行處理時(shí)，首先以0.05mol/l?nahco3溶液為洗脫液，洗脫出中性多糖?ntwp-n后；然后依次用?0.1?mol/l、0.25?mol/l、0.5?mol/l?nahco3溶液梯度洗脫，對(duì)各洗脫液進(jìn)行苯酚-硫酸法檢測(cè)，其中顯色最深的洗脫峰為酸性多糖?ntwp-a。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟（4）所述溶解用tris-hcl?緩沖液進(jìn)行，將溶解后的液體上樣后，用平衡液洗脫30min，收集流出液，而后采用nacl線性梯度洗脫，收集洗脫液；對(duì)流出液和各洗脫液進(jìn)行苯酚-硫酸法檢測(cè)，合并顯色最強(qiáng)的單一洗脫峰。
6.利用權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)所述制備方法制備得到的白刺多糖?ntwp-ap。
7.權(quán)利要求6所述白刺多糖?ntwp-ap在制備免疫調(diào)節(jié)劑中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求6所述白刺多糖?ntwp-ap在制備pd-1抗體增敏劑中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求6所述白刺多糖?ntwp-ap在制備巨噬細(xì)胞m2向m1極化轉(zhuǎn)變的促進(jìn)劑中的應(yīng)用。
10.一種治療腫瘤的藥物，其特征在于，包括權(quán)利要求6所述白刺多糖?ntwp-ap和pd-1抗體。